| - Dejar a
-20°C toda la noche. - Centrifugar 20 minutos al máximo. De esta manera el ARN precipitará en forma de un botón blanco en la base del eppendorf. - Eliminar el sobrenadante por decantación suavemente y lavar el botón con 500 ml de etanol 70%. - Dar un pulso de centrifugación y retirar el etanol excedente. Dejar secar 15-30 min con la tapa abierta (en el cuarto estéril). - Resuspender el ARN con 100 ml de H20 dEPC. SOLUCIONES PARA LA EXTRACCIÓN DE ARN TOTAL ACETATO DE
SODIO 2M pH 4,0 PM:
82,03 g ACETATO DE
SODIO 3M pH 4,0 PM:
82,03 g CITRATO DE
SODIO 0,75 M pH 4,0 PM: 294,1g ISOPROPANOL SDS 10%
PM: 288,38 g TIOCIANATO DE
GUANIDINIO 4M PM: 288,38 g PREPARACIÓN
DE SOLUCIÓN A SDS 10 % 3.360 ml La solución se
la guarda a 4°C Nota:
Para preparar la solución A es mejor utilizar el lauril
sarcosinato (Sigma No. L5125) en lugar del SDS, el lauril
se utiliza en el artículo original. El SDS tiene la
misma acción pero su solubilidad es menor. Verificación de ARN Para testar el ARN se utiliza un gel de agarosa al 0,8%. Se podrá visualizar dos bandas correspondientes a los dos tipos de ARNr. El ARNm no se logra visualizarlo pues su porcentaje es bajo y se requieren otros métodos para hacerlo. |