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Con los requerimientos de temperatura y pH se trata de igualar las condiciones in vivo, esto es de 36-38§ C y de 7,0-7,4 respectivamente.  Si la temperatura supera los 39§ C provocará la muerte de las células cultivadas, mientras que si es inferior a los 36§ C disminuirá el índice de divisiones celulares, perjudicando la calidad de la preparación. En la preparación cromosómica es necesario emplear un inhibidor del huso mitótico, especialmente en cultivos no sincronizados bloqueando el paso entre metafase y anafase. Este tipo de químicos impiden la formación de las fibras del huso a las cuales se "ancla" el centrómero de cada uno de los cromosomas metafásicos, para que cada cromátide sea llevada a uno de los polos celulares.  Entre estos químicos se cuentan la Viniblastina, la Colchicina y su análogo la Colcemida.

Se debe tener en consideración que el tiempo al que las células están expuestas al inhibidor del huso acromático es proporcional al índice metafásico, pero una exposición prolongada resulta en la reducción de la longitud de los cromosomas, de ahí que se ha estimado el tiempo de exposición en 1,5 a 2 horas para lograr un número adecuado de metafases con cromosomas lo suficientemente elongados que facilite una buena resolución al realizar  el bandeo cromosómico.

Parte esencial de la preparación de cromosomas es el tratamiento con un choque hipotónico.  Una solución hipotónica es aquella con una concentración salina menor a la del citoplasma celular, de tal manera que dictado por las leyes del movimiento osmótico habrá un ingreso de H2O desde la solución hipotónica hacia el interior de la célula.  Este fenómeno hincha las células, hemoliza la mayor parte de los eritrocitos y complementa la acción del inhibidor del huso mitótico ayudando a la dispersión de los cromosomas.

La morfología cromosómica también se verá influenciada enormemente por el proceso de fijación, el fijador usado con más frecuencia en las preparaciones cromosómicas es una mezcla de tres partes de alcohol (etanol absoluto o metanol) y una parte de ácido acético glacial conocida como fijador de Carnoy.  El fijador juega un papel muy importante en el aplanamiento y separación de los cromosomas, y provoca, además, la hemólisis de los glóbulos rojos remanentes en la muestra.  La exposición excesiva de las células a la solución de Carnoy resultará en la ruptura prematura de la membrana celular y la consecuente pérdida del material genético.

MATERIALES

- 3 ml de sangre periférica                              - gradilla
- 3 ml de medio de cultivo suplementado.              - estufa
- 100 microlitros de Colchicina (Colcemida)            - baño María 
- solución hipotónica (Cl al 0,54%)                  - centrífuga
- fijador de Carnoy (metanol-ácido acético 3:1)        - mechero
- solución de extensión al 40% agua-ácido acético      - placas portaobjetos
- tubos cónicos o frascos de vidrio para cultivo.      - pipetas Pasteur
- pera de goma

 

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