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POLIMORFISMO DEL ADN
AMPLIFICADO AL AZAR (RAPD)
Eduardo
Morillo Velasteguí. Departamento Nacional de Recursos
Fitogenéticos y Biotecnología (DENAREF) - Quito.
ANTECEDENTES
Uno de los aportes fundamentales de la PCR es la
posibilidad de generar grandes cantidades de ADN de
segmentos específicos del genoma. La técnica de PCR
representaba una limitación significativa en la
obtención de marcadores moleculares anónimos
distribuidos en el genoma. La construcción de cebadores
para la amplificación vía PCR dependía esencialmente
del conocimiento previo de las secuencias de nucleótidos
que limitan la secuencia de ADN de interés. Para conocer
estas secuencias es necesario el clonaje y secuenciación
de la región. En vista de esto, con excepción de
algunos genes de secuencia conocida, la PCR representó
de inicio, un uso limitado como técnica para la
obtención de marcadores moleculares.
Un gran avance en el área de marcadores moleculares
basados en PCR ocurrió en 1990, con la idea de utilizar
"cebadores" más cortos y de secuencia
arbitraria para dirigir la reacción de amplificación,
eliminando así la necesidad del conocimiento previo de
la secuencia. Esta técnica fue desarrollada
independientemente por dos grupos en los Estados Unidos,
William y cols. (1990) que plantearon la
tecnología con el nombre de RAPDs y Welsh &
McClelland (1990), que la llamaron AP-PCR (Arbitrary
Primed-Polymerase Chain Reaction).
Independientemente del nombre utilizado y de pequeñas
variaciones en la metodología, la técnica de RAPDs
constituyó una verdadera "democratización"
del análisis de polimorfismo molecular, al permitir la
realización de estudios de análisis genética en
especies anteriormente no contempladas. Desde su
descripción, el uso de RAPDs en el mejoramiento de
plantas ha tenido una difusión extremadamente rápida.
Las aplicaciones incluyen:
1) Obtención de "fingerprints" genómicos de
individuos, variedades y poblaciones;
2) Análisis de estructura y diversidad genética en
poblaciones naturales, poblaciones de mejoramiento y
bancos de germoplasma;
3) Establecimiento de relaciones filogenéticas entre
diferentes especies;
4) Construcción de mapas genéticos de alta cobertura
genómica y localización de genes de interés económico
(Rafalski y cols., 1991; Williams y cols.,
1993; Tingey e Deltufo, 1993).
BASES GENETICAS DE MARCADORES RAPDs
RAPDs es básicamente una variación del protocolo de
PCR, con dos características distintivas:
1) Utiliza un "cebador" único en vez de un par
de "cebadores";
2) El cebador único es de secuencia arbitraria, y por
tanto la secuencia
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