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  Positivo  (ADN de plásmido que contiene el fragmento de                  ADNc Tc24).
Negativo (ADN de sangre de individuos negativos para infección por T. cruzi).

Los productos de la amplificación se visualizan mediante tinción de los geles con bromuro de etidio luego de electroforesis en agarosa al 1%, bajo luz UV.

METODO II
En un volumen total de 75
ml se utiliza el procedimiento de "hot start" PCR con las siguientes condiciones: 4 ul de 10X buffer (Tris-HCl 100mM (pH 8,3), KCl 500 mM), 1,8 ml de un stock dNTPs 10 mM, 13,5 ml de una solución MgCl2 25 mM, 200 ng de cebadores específicos para T.cruzi:

5´-AAATAATGTACGGG(T/G)GAGATGCATGA-3´ y
5´-GGTTCGATTGGGGTTGGTGTAATATA-3´,   

Luego se añade agua hasta 40
ml y se deja a 80oC durante 5 minutos, luego se añade 7,5 ml de la muestra de ADN o los respectivos controles,  3,5 ml de buffer 10X, Taq polimerasa 2,5U y agua hasta 35 ml. La reacción se realiza mediante dos ciclos a 98oC de 1 minuto cada uno y 64oC por dos minutos, 33 ciclos a 94oC por 1 minuto, 64oC por 1 minuto y una extensión de 10 minutos a 72oC. Los productos de amplificación se visualizan mediante electroforesis en agarosa al 2% y coloración con bromuro de etidio.

 

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