| la PCR donde partimos de ARN
mensajero para sintetizar ADN complementario listo para
la PCR. Este proceso se denomina RT-PCR. Luego de
obtenido el ADN copia procedemos a la amplificación
típica por PCR. Se ha amplificado la secuencia de
nuestro interés (reestructuración del oncogen bcr-abl)
mediante dos estadíos de PCR. En el primero amplificamos
una secuencia externa de 390 pb a 465 pb, y en el
segundo una secuencia interna de 292 pb a 217 pb. Este
proceso se denomina PCR anidado y tiene como fin aumentar
la especificidad, eficiencia y sensibilidad de la
reacción. Estudios previos han demostrado que la
sensibilidad de esta técnica puede detectar incluso una
célula leucémica entre un millón de células sanas. Se analizaron 35 muestras de médula ósea, 21 de Leucemia Mieloide Crónica (LMC) y 14 de Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA). Todas a través de un análisis citogenético y molecular. Se cuidó que las muestras provengan de individuos que al momento no estén recibiendo tratamiento. Los hallazgos citogenéticos mostraron un 52% (11 de 21) la presencia de cromosoma Filadelfia en LMC y un caso en LLA. Por otro lado el análisis molecular demostró la presencia del oncogen en 72% de las LMC (17 de 21) con un 54% del tipo b2a2 y 46% del tipo b3a2; y 28% (4 de 14) de las LLA del tipo b1a2. Las frecuencia encontradas no tienen diferencias significativas con lo informado en la literatura. Estos análisis moleculares aportaron significativamente en el tratamiento y manejo de los individuos afectos analizados en este estudio. Pese a la importancia de los estudios moleculares en leucemias a nivel mundial, en nuestro país no existen estudios previos sobre el tema. Por tal motivo el objetivo de este trabajo es ampliar el conocimiento sobre los aspectos moleculares del oncogen bcr-abl y utilizar la técnica molecular de la PCR (Reacción en Cadena de la Polimerasa) como método alternativo, mucho más sensible y certero para el diagnóstico de leucemias Ph positivo y sobre todo para evaluar la enfermedad mínima residual de los individuos, esto es la presencia de células leucémicas remanentes luego de haber recibido tratamiento. |