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APLICACION DE LA
RETROTRANSCRIPCION Y LA PCR (RT-PCR) PARA EL ESTUDIO DEL
ONCOGEN BCR-ABL EN LEUCEMIAS
CRONICAS Y AGUDAS
César
Paz y Miño, Mercedes Del Pozo, Ramiro Burgos,
Paola E. Leone. Laboratorio de Genética Molecular y
Citogenética Humana, PUCE.
La Genética ha logrado dilucidar que el cáncer sería
la consecuencia de un desorden genético caracterizado
por la pérdida del control normal del crecimiento
celular. El desarrollo de la línea celular transformada
implica desregulación de la división y diferenciación
celular, inestabilidad genómica y posterior invasión a
tejidos adyacentes. Existen al menos dos tipos de genes
implicados en el origen y progresión del cáncer: los proto-oncogenes
y los genes supresores de tumor. La función
normal de estos es la regulación del crecimiento y
diferenciación celular. Esta función puede alterarse
debido a desordenes genéticos como deleciones,
translocaciones, mutaciones puntuales, duplicaciones de
genes, entre otras, que transforman los genes normales en
oncogenes y genes supresores alterados
respectivamente .
El cromosoma Filadelfia (Ph), fue observado en el 95% de
individuos con Leucemia Mieloide Crónica (LMC) y en el
10 a 15% de Leucemias Linfoblásticas Agudas (LLA). En
las LMC esta alteración está dividida en dos fases: una
fase crónica inicial que dura un promedio de 2 a 4 años
y que usualmente progresa hacia una crisis blástica, la
segunda fase, caracterizada por un crecimiento no
regulado de células blásticas, inmaduras linfoides o
mieloides y una pérdida de la diferenciación.
El cromosoma Filadelfia resulta de una
translocación entre el gen abl del cromosoma 9 y
el gen bcr del cromosoma 22 (t(9;22) (q34;q11)).
Esta aberración ocurre en un 95% de individuos
con LMC y en alrededor del 20% de individuos con
LLA. En una metafase el cromosoma Filadelfia se aprecia
como un cromosoma 22 de menor tamaño en relación
a su par homólogo. A nivel molecular esta
translocación origina el oncogen quimérico bcr-abl,
que codifica para una proteína tirosina kinasa sin
extremo amino terminal por lo que tiene mayor
actividad fosforilativa, produciendo consecuentemente el
excesivo crecimiento celular. Existen tres tipos de
productos oncogénicos según la región de corte de
ambos genes: b2a2, b3a2 y b1a2. Los dos
primeros son típicos de LMC y codifican para una
proteína tirosina kinasa de 210 kd y el último es
propio de LLA y codifica para una tirosina kinasa de 190
kd.
Hemos usado la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR)
en su modalidad PCR-ANIDADO, para observar el
comportamiento del oncogen quimérico bcr-abl en
leucemias, a partir del análisis de su ARN mensajero. Se
extrajo el ARN de las muestras mediante el método
desarrollado por Chomczyinski y Sacchi. Una vez extraído
el ARN realizamos una retro-transcripción que es una
modalidad de
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