3. RADIACION ULTRAVIOLETA (UV).
La luz UV, radiación no ionizante, induce la formación de dímeros de timina en el ADN, que actúan como bloqueadores temporales o permanentes de la progresión de la horquilla de replicación del ADN, pero causa pocas roturas de los filamentos cromosómicos.  Como consecuencia de la dimerización se producen anomalías en la conformación de la doble hélice distorsionándose la replicación normal del ADN, conduciendo a la muerte de la célula o a la producción de mutaciones.

MATERIALES
- 3ml de sangre periférica heparinizada                    - placas portaobjetos
- 3 ml de medio de cultivo suplementado            - pipetas Pasteur con pera de goma
- Afidicolina                                                - tubos cónicos o frascos de cultivo
- 100 microlitros de Colchicina (Colcemida)                - gradilla
- solución hipotónica (KCl al 0,54%)                        - estufa
- fijador de Carnoy (Metanol-ácido acético 3:1)            - baño María
- solución de extensión al 40% (agua-ácido acético)      - centrífuga
- placas portaobjetos                                            - mechero
- pipetas Pasteur con pera de goma                          - Microscopio

PROCEDIMIENTO
1. Tomar 3 ml de sangre venosa en una jeringa estéril que contenga previamente una gota de anticoagulante (Heparina).
2. En condiciones de esterilidad, colocar en un tubo cónico o en un frasco de vidrio 3 ml de medio de cultivo suplementado, 9 gotas de la muestra de sangre heparinizada y Afidicolina en una concentración de 0,2 micromoles/ml.
3. Poner a cultivar en una estufa a 37° C por 72 horas.  Dos horas antes de la cosecha añadir al cultivo 100 ml de Colchicina.
4. Sacar la muestra de la estufa y someterla a centrifugación por 5 minutos a 2.500 rpm, extraer el sobrenadante con una pipeta Pasteur debidamente rotulada dejando aproximadamente 1 ml por sobre el precipitado y resuspender.
5. Introducir la muestra resuspendida en la pipeta Pasteur y agregar 6 ml de solución hipotónica precalentada a 37° C en el tubo cónico, dejar resbalar el contenido de la pipeta por las paredes del tubo e incubarlo por 20 minutos a 37 °C en el baño María.
6. Centrifugar por 5 minutos (2.500 rpm), extraer el sobrenadante y resuspender.
7. Retirar el precipitado en la pipeta Pasteur y añadir al tubo 3 ml de fijador de Carnoy, agregar al tubo cónico con fuerza el contenido de la pipeta y resuspender la mezcla 2 o 3 veces.  Dejar reposar la preparación al medio ambiente por 20 minutos.  Pasado este tiempo someter a centrifugación, eliminar el sobrenadante y resuspender.
8. Añadir por tres ocasiones más 3 ml de fijador y repetir el procedimiento.  Con la finalidad de mejorar la preparación cromosómica se puede someter la muestra a refrigeración por 30 minutos después del cuarto fijador, previa a la centrifugación.
9. La cantidad de sobrenadante que debe ser eliminada después de la última centrifugación debe ser
menor, dejando por sobre el precipitado cerca de 2 ml de líquido.