| 5. Para
preparar el gel luego de que esté correctamente armado
el molde, se deben mezclar las soluciones stock ya
descritas. De acuerdo a los objetivos de trabajo y a la
experiencia del investigador se pueden formar geles en
varias concentraciones, la usada en esta práctica es la
siguiente: (Fig. 4 y Fig.5) Gel de poliacrilamida al 6 % Para este gel se deben mezclar: 6 ml. de la solución de poliacrilamida (sol. A) 4 ml. de glicerol 30 ml. de 5x TBE (sol. B) 33 ul. de TEMED (N,N,N',N'- tetrametilenediamida) 350 ul. de PSA (sol. C) 6. Colocar cuidadosamente esta preparación en el molde y esperar hasta que el gel se solidifique. 7. Luego se colocan en cada pocillo 7 ul. de la muestra de ADN a analizarse mezclado con 4 ul. del colorante de elección. 8. Conectar el equipo de electroforesis para permitir la migración de las muestras a un voltaje constante durante aproximadamente 4 horas, lo que podría variar de acuerdo a las condiciones de laboratorio. 9. Pasado este tiempo sacar el gel del molde y sumergirlo en una solución de bromuro de etidio o en una solución de plata preparada según los objetivos de la investigación. Este paso permitirá la tinción del gel. 10. Analizar bajo luz ultravioleta el gel para poder observar la manera en que migraron las muestras en estudio. Registrar los datos. 11. Tomar una foto del gel resultante usando el equipo de fotografía adecuado para este objetivo. DETECCION DE MUTACIONES En el análisis de la SSCP, el cambio de un solo nucleótido es suficiente para alterar la estructura tridimensional de la molécula. Por lo tanto, el patrón de bandas de la muestra mutada variará al compararlo con el patrón de bandas de la muestra normal, lo que proporcionará información de la presencia de algún polimorfismo o mutación, es decir un cambio nucleotídico en la secuencia amplificada. Si el patrón de bandas de la muestra problema coincide con la muestra normal se podrá concluir que no ha existido ningún cambio en esta secuencia.(Fig. 5). RESULTADOS CONCLUSIONES
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