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  SEPARACIÓN DEL ARNm DE LAS CÉLULAS LISADAS CON NÚCLEO LIBRE

- Remover el binding buffer 2X de las perlas colocándolo en el MPC, retirar y añadir la muestra que se encuentra con la solución de lisis.
- Con una jeringuilla  tomar la muestra  y aspirarla  dos veces (romper ADN). Dejar reposar la muestra durante 5 minutos (unión de perlas con ARNm)
- Colocar el eppendorf en el MPC, retirar el sobrenadante y retirar el eppendorf del MPC.
- Añadir el buffer de lavado, colocar en el MPC y retirar sobrenadante.  Repetir este procedimiento dos veces.
- Añadir buffer RT para conservar las muestras a -20°C.

PREPARACIÓN DE SOLUCIONES DYNABEADS

ARNm Purification Kit

PBS pH 7,4

Lysis Buffer con NP-40 1% NP 40
  10 mM  Tris-HCl (pH 7,5)
0,14 M  NaCl
        5mM  KCl

Binding Buffer 2X  20 mM  Tris-HCl (pH 7,5)
1,0 M  LiCl
      1 mM  EDTA (pH 8,0)

Buffer de lavado  10 mM  Tris-HCl (pH 7,5)
0,15 M  LiCl
      1 mM  EDTA

RT Buffer  10 mM  Tris
(conservación ARN)          75 mM  KCl

 

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