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Práctica
9: EXTRACCION DE ADN Y REACCION EN CADENA DE LA
POLIMERASA (PCR) OBJETIVOS
1.- Aprender la técnica de extracción de ADN
humano a partir de sangre periférica.
2.- Usar el ADN extraído en la Reacción en cadena
de la polimerasa (PCR)
3.- Conocer las aplicaciones de la PCR.
INTRODUCCION
La PCR es una reacción bioquímica in vitro
catalizada por un enzima, en el cual pequeñas cantidades
de un segmento específico de ADN, que se hallan entre
dos regiones de ADN de secuencia conocida, son
amplificadas obteniéndose una gran cantidad de ADN
linear de doble cadena. Debido a que la PCR está
basada en la acción enzimática de una ADN polimerasa
(la más comúnmente utilizada es la Taq ADN pol I que es
una de las enzimas más extensamente caracterizada y
aplicada en biología molecular), la tecnología de la
PCR fue aplicada inmediatamente en varias áreas de
investigación, incluyendo la tecnología del ADN
recombinante, la expresión génica, medicina general,
medicina forense y evolución. Actualmente, la
tecnología de la PCR ha adquirido mayor
importancia con el desarrollo de las enzimas de
restricción, con el clonaje del ADN y con el Southern
blotting en el avance de la biología molecular.
Los primeros experimentos de amplificación con PCR
fueron realizados por el Dr. Mullis y el Dr. Fred A.
Faloona, un matemático quien desarrolló el primer
dispsitivo automático regulador de la temperatura en
ciclos, conocido como termociclador o máquina de PCR
(Mullis y Faloona, 1987).
La amplificación del ADN se obtiene por ciclos repetidos
de PCR, cada uno de los cuales tiene tres estadíos de
temperatura distintos:
1) Desnaturalización del templado o
"plantilla" de ADN (ADN que servirá de modelo
para su amplificación) que necesita de 94 a 96° C.
2) Unión o annealing de los primers (conocidos también
como cebadores). Los primers son oligonucleótidos,
formados por moléculas de cadena simple de ADN que son
complementarios a ambos extremos de una secuencia
determinada de ADN que actúa como templado o
plantilla. Su función es servir al templado de ADN
como punto de partida para la polimerización. Este
paso requiere una temperatura que varía entre los
42 a 60° C; y
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