| SITIOS FRAGILES COMUNES 1) Inducidos por Afidicolina: su expresión aumenta en condiciones de estrés de folato. 2) Inducidos por 5-azacitidina: se potencian al añadir 5-azacitidina, 5-8 horas antes de la cosecha. 3) Inducidos por BrdU: se potencian al añadir BrdU 4-6 horas antes de la cosecha. Se ha observado que todos estos químicos inhiben (bloquean) o retrasan la replicación del ADN y acortan la longitud de la fase G2 o del ciclo celular en las secuencias de los sitios frágiles. Si la G2 es muy corta, la condensación cromosómica es incompleta en las regiones de replicación tardía, dando como resultado un GAP. Se habla entonces de que dicha región tuvo una G2 muy limitada y no alcanzó a ser marcada con una "señal de condensación". Es así que los gaps representan regiones de condensación incompleta de la cromatina. Se cree en cambio, que las ROTURAS se producen cuando se aplica la fuerza a nivel de los gaps, pues en ellos hay mayor fuerza por unidad de área a nivel de las cadenas individuales de las cromátides, que en los sitios de ADN altamente condensado. Algunas de estas fuerzas pueden ser generadas por el proceso de condensación, sobre todo si los extremos del cromosoma permanecen anclados a la matriz de la membrana nuclear. Estos sitios están flanqueados por horquillas de replicación que son susceptibles a sufrir roturas in vitro y probablemente in vivo (Ver figura 10). Se ha tratado de explicar la replicación tardía mediante la existencia de mutaciones que afectan la eficiencia con que son usados los "orígenes y finales de replicación", por ejemplo a través de la inserción de secuencias o fragmentos de ADN y recombinación desigual que ampliarían la distancia entre un origen de replicación y otro. Se cree además que ciertos procesos de metilación pueden llevar a replicación tardía del ADN. MATERIALES -placas preparadas -microscopio óptico -aceite de inmersión PROCEDIMIENTO 1. Se coloca la placa extendida y teñida en el microscopio con la rotulación a la derecha y se observa del extremo izquierdo al extremo derecho con un movimiento en zig-zag; se localizará las metafases con el lente de 10X y se procederá a anotar las coordenadas de ubicación de la metafase, una vez localizada se verá con el lente de 100X con aceite de inmersión. 2. Para el registro de datos se anota el número de placa, que se encuentra en un extremo de la misma, así como las coordenadas de ubicación de la metafase a analizar, número de cromosomas y los daños que presenten. 3. Observar un mínimo de diez metafases y dibujar una de ellas, con la identificación de cada cromosoma a nivel de grupo cromosómico. Anote las alteraciones cromosómicas que encuentra de acuerdo a la nomenclatura establecida.
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