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perspectiva de
poder aplicar la AP-PCR a grandes series de muestras de
hemolinfa, se realizó un grupo de experimentaciones que
tuvo como meta disponer de un protocolo simple y eficaz
para extraer ADN.
Por ello, las células sanguíneas (hemocitos) fueron
sometidos a ebullición en diversos tampones y luego
centrifugados. Si bien este protocolo reducía de
forma drástica la cantidad de tiempo utilizado durante
el proceso, la calidad del ADN resultó ser muy variable,
afectando por consiguiente la reproducibilidad de la
AP-PCR. El uso del reactivo DNAzol permitió
resolver este problema.
En estas condiciones fue posible obtener regularmente
productos de amplificación para muestras de hemolinfa
con volúmenes entre 300 y 500 ml.
APLICACION
Con este protocolo fue posible efectuar un trabajo
exploratorio para asociar potenciales marcadores
genéticos y características inmunitarias en el camarón
P. vannamei (Robalino, 1997). Utilizando la
misma muestra de hemolinfa, y gracias a seis pruebas que
han sido recientemente puestas a punto en CENAIM, fue
posible cuantificar diversos tipos de indicadores
inmunitarios: cantidad de hemocitos, actividad
antibacteriana del plasma, metabolismo respiratorio de
los hemocitos y cantidades de alfa 2 macroglobulina, de
una aglutinina y del factor de coagulación.
Fueron analizados doce camarones sobrevivientes, a partir
de un total de 100, para los cuales se determinaron sus
perfiles RAPDs con la ayuda de dos cebadores permitiendo
su caracterización genética.
CONCLUSIONES
- Este
trabajo contribuye a iniciar programas de
selección y domesticación de líneas de
camarones P. vannamei, ya que se podría
realizar simultáneamente la caracterización
genética e inmunitaria de camarones adultos a
partir de reducidos volúmenes de hemolinfa.
- Es factible
la creación de una base genética de datos
utilizando diferentes poblaciones silvestres y
mantenidas en cautiverio, de P. vannamei,
para iniciar la búsqueda de potenciales
marcadores genéticos asociados con orígenes
geográficos determinados y/o características
fenotípicas de interés.
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