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ENFERMEDAD DE CHAGAS: DIAGNOSTICO MOLECULAR POR PCR


Angel G. Guevara. Laboratorio de Investigaciones Clínicas, Servicios Comunitarios, Hospital Vozandes - Quito.

La enfermedad de Chagas es causada por el protozoario Trypanosoma cruzi, esta parasitosis afecta cerca de 20 millones de personas en América Latina y  existen unas 100 millones de personas en riesgo. El ciclo vital de este parásito es muy complejo y constituye uno de los pocos parásitos cuya transmisión se realiza de una manera indirecta a través de las heces del vector. Una vez establecida la enfermedad presenta tres fases bien definidas: una fase aguda caracterizada por manifestaciones clínicas diversas, malestar general, síntomas benignos atípicos, muy pocos casos se detectan en esta fase aunque hay una parasitemia positiva, la mortalidad en los niños puede variar entre 2 a 8%. Cuando el sitio de entrada del parásito es la conjuntiva ocular se presenta el signo característico de Romaña que puede facilitar el diagnóstico clínico, parasitológico y el subsecuente tratamiento; sin embargo, este hecho no ocurre frecuentemente. Luego sigue una fase indeterminada que se inicia entre 8 a 10 semanas después de la infección y que puede durar 10 a 20 años o indefinidamente, la serologí es positiva aunque la parasitemia por los métodos clásicos suele ser negativa. La fase crónica se caracteriza por el desarrollo de patologías que generalmente son irreversibles como cardiopatía chagásica, visceropatía chagásica, en menor escala neuropatía chagásica, en esta fase la serología es positiva y la parasitemia casi no detectable.
Durante nuestro trabajo de investigación, nuestro interés se centró en el análisis del efecto de los antígenos de excreción/secreción durante la enfermedad de Chagas experimental. Para el efecto, se obtuvieron los antígenos de excreción/secreción mediante activación in vitro de trypomastigotes; estos antígenos fueron utilizados para inmunizar ratones BALB/c con BpAl como adyuvante,  de estos animales se obtuvo suero y se lo analizó en Western blot contra un extracto antigénico total de trypomastigote y se observó que, entre otros componentes, uno de 24 kDa fue reconocido por el suero de animales inmunizados así como por el suero de animales infectados. Con el suero dirigido contra los antígenos de ES realizamos un screening  de una librería de ADN complementario y logramos aislar varios clones que contenían un ADNc de 683 pares de bases, equivalentes a 211 aminoácidos y que codifica para una proteína de 24 kDa.  El ADN que codifica para esta proteína fue secuenciado e identificados los sitios de inicio de la transcripción, de inicio de la traducción y de fin de traducción, con estos datos fue factible diseñar oligonucleótidos específicos para esta secuencia de T.cruzi y desarrollar la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (Polymerase Chain Reaction = PCR) para determinar la presencia de T. cruzi en muestras biológicas como sangre, tejido e inclusive muestras fecales de vectores responsables de la transmisión de la enfermedad de Chagas.

 

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