UTILIDAD DIAGNOSTICA DE LA DETECCIÓN DE MUTACIONES EN EL GEN C-K-RAS EN MASAS PANCREATICAS

Germán Reyes^{1 - 2} Alberto Villanueva1 ², Felix Lluis ², Gabriel Capellá ². Instituto de Biología Molecular Tropical - Guayaquil¹. Laboratorio de Investigación Gastrointestinal, Hospital de la Santa Cruz y San Pablo - Barcelona ².

INTRODUCCION
En la actualidad, el cáncer de páncreas (CP) es la cuarta causa de muerte por cáncer en el mundo occidental. El diagnóstico de esta neoplasia es difícil; la mayoría de pacientes con CP presentan estadios tumorales avanzados. La supervivencia media después del diagnóstico es de unos 6 meses y no ha variado en los últimos 30 años. En pacientes con sospecha clínica de CP los métodos de diagnóstico por la imagen (ecografía o Tomografía Axial Computarizada [TAC]) son los que proporcionan una mayor eficacia diagnóstica y permiten la punción-aspiración percutánea de cualquier masa pancreática y la obtención de un material que posibilita un diagnóstico histológico definitivo en una proporción importante de los pacientes.
Estudios previos han demostrado que la mayoría (70-90%) de los carcinomas de páncreas exocrino en el hombre contienen una mutación en el codon 12 del gen c-K-ras. La elevada incidencia de la mutación y su especificidad tumoral hacen de esta alteración genética un posible marcador tumoral a nivel tisular. En el presente estudio hemos analizado, de forma retrospectiva, la utilidad de las mutaciones ras en la valoración del material obtenido mediante punción aspiración percutánea con aguja fina de masas pancreáticas bajo control radiológico que fueron realizadas de forma consecutiva en el Hospital de la Santa Cruz y San Pablo.


MATERIAL Y METODOS
Se analizó, de forma retrospectiva, el material obtenido de 97 punciones aspiraciones percutáneas con aguja fina de 77 masas pancreáticas. Todas las punciones se realizaron bajo control ecográfico o de tomografía axial computarizada (TAC).
Diagnóstico citológico: Con una porción del material aspirado se realizan extensiones directas (Giemsa y Papanicolau). El resto del material se incluyó en parafina. El diagnóstico morfológico se basó en el examen de las muestras siguiendo criterios citopatológicos clásicos y fueron revisados por el mismo patólogo.
Extracción de ADN de muestras fijadas y conservadas en parafina: Se utilizó la digestión con proteinasa K y la extracción con fenol/cloroformo.
Detección de mutaciones mediante polimorfismos de los fragmentos de restricción introducidos de forma artifical en los productos amplificados (RFLP/PCR artificial): La presencia de las mutaciones se detectó mediante los polimorfismos de los fragmentos de restricción (RFLP) que se han introducido de forma artificial utilizando oligonucleótidos cebadores (primers)