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ESTUDIOS GENETICO-MOLECULARES EN EL ANALISIS DEL CANCER


César Paz y Miño. Laboratorio de Genética Molecular y Citogenética Humana, PUCE.

En la actualidad gracias a los progresos tecnológicos en la determinación de las secuencias de ADN, se  puede contar con  mucha cantidad de datos que están permitiendo dilucidar la complicada maquinaria de los genes. Como resultado de este progreso se ha logrado contestar algunas preguntas de orden biológico, así como un claro avance del potencial biomédico en el diagnóstico del cáncer y de enfermedades hereditarias. Algunas de las pruebas de laboratorio útiles para detectar alteraciones de los oncogenes son:

1) Test de proteínas truncadas (Protein Truncation Test, PTT): Es específica para evaluación de mutaciones (frameshifts, sitios de empalme alternativo y nonsense). Se parte de una RT-PCR la cual produce un ADN copia, el producto amplificado tiene una terminación alternativa similar al promotor del fago T7, esta unión de ADNc y el promotor resulta en un producto observable en gel, con una migración diferente a la normal.

2) Rotura Química/Enzimática por Malemparejamiento (Chemical/Enzimatic Cleavage Mismatch, C/ECM): Se basa en la hibridación del ADN con sustancias radiactivas. En el sitio de pérdida de emparejamiento de bases se produce una rotura, que es detectada en un gel, comparándola con ADN normal. En el caso de uso de enzima, se usa una ADN polimerasa implicada en la reparación del ADN, y en el sitio que encuentra la alteración, produce una rotura-escisión.

3) Electroforesis en Gel de Gradiente Desnaturalizante (DGGE): Aunque sigue el mismo principio de la SSCP, utiliza un gel de acrilamida conteniendo químicos desnaturalizantes o se usa temperaturas diferenciales, además requiere cebadores ricos en CG. Las muestras de ADN migran hasta el punto en que funden o polimerizan el gel. Se lo hace siempre comparándola con tejido normal.

4) Polimorfismo en la Conformación de la Cadena Sencilla (SSCP): El  ADN de cadena doble es desnaturalizado a dos cadenas simples y  cargado en un gel de poliacrilamida,  donde se podrá evidenciar si existe algún desorden por la posición de las bandas de la muestra mutada versus la normal. De manera que en el análisis de SSCP, una secuencia mutada, induce a una movilidad electroforética diferencial en un gel de poliacrilamida, causada por una alteración en la  estructura espacial tridimensional del ADN.

5) Mobilidad del Heterodúplex en Geles (HGM): Es similar a la anterior, pero parte de ADN no desnaturalizado, el análisis se lo hace en comparación con el homodúplex, se detectan cambios de movilidad extra, se la utiliza en conjunto con la anterior.

6) Secuenciación: Identifica la alteración precisa de la mutación. Utiliza un juego de bases defectivas y una amplificación de ADN con un solo cebador.

7) Expansión Repetida de Tripletes: Se usa para despistaje de genes candidatos o de predisposición que presente tripletes de bases repetidos. Existen pruebas para

 

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