USO DE STR (SHORT TANDEM REPEATS) EN PRUEBAS DE PATERNIDAD Y FORENSE

Ramiro Burgos^1-2, Pedro León², Paola E. Leone¹, César Paz y Miño¹. Laboratorio de Genética Molecular y Citogenética Humana, PUCE¹. Centro de Investigación en Biología Celular y Humana, Costa Rica².

Los loci STR (repeticiones cortas en tandem) por ser altamente  polimórficos y frecuentes en el genoma humano (1 loci cada 300 a 500 Kilobases) son una importante herramienta en estudios de genética epidemiológica, identificación de individuos e investigaciones en evolución.

En el Ecuador existe una gran mezcla étnica y por consiguiente se pensaría una gran diversidad génica, es por este motivo que resulta interesante conocer la composición de nuestra  población, ya que para realizar este tipo de pruebas se necesita conocer la frecuencia de los alelos, que luego serán amplificados por PCR y determinar además, si la población mantiene el  equilibrio de Hardy - Weinberg (p²+2pq+q²) y el  equilibrio del ligamen (que los loci se hereden al hazar), si esto no ocurre los resultados estadísticos podrían verse distorcionados, obligando a usar otro tipo de análisis estadístico.

Actualmente se dispone de una gran diversidad de sondas de ADN que pueden usarse para esta prueba, así que, se debe tomar en cuenta ciertos parámetros para elegir la sonda a utilizarse en cada población, tales como el número de alelos detectados y por lo tanto su grado de polimorfismo, la frecuencia de estos y el grado de heterocigosis del loci.
Con los parámetros expuestos, en el presente trabajo se usaron 12 loci STR (24 cebadores) de secuencia tetranucleótida en la resolución de 10 casos de paternidad y uno de identificación de restos humanos.  Estos STR son los recomendados en las convenciones internacionales de laboratorios de Genética dedicados a pruebas de paternidad y forence. Se extrajo ADN de sangre periférica conservada en papel filtro y de hueso en los casos para identificación de restos. Se usaron dos métodos de extracción de ADN, Chelex en los casos de paternidad con muestras sanguineas y fenol-cloroformo para hueso. La PCR se realizó bajo las siguientes condiciones:

Para el análisis del amplificado se usó electroforesis en gel de poliacrilamida al 6%,  con un voltaje de 1.600 (35 miliamperios) y tinción con plata.  Para determinar el tamaño del alelo amplificado (los amplificados utilizados van de 131 a 214 pares de bases), las muestras se corrieron junto a un marcador de peso molecular de 10 pb (rango entre 20 y 240).

En ocho de los diez casos de paternidad la persona imputada se la implico como padre con un 99,99% de probabilidad, mientras que los otros casos presentaron 4 y 6 exclusiones respectivamente, es decir que de los 12 STR utilizados solo coincidieron 8 y 6 respectivamente. En el caso de la identificación de restos en hueso se obtuvo también un resultado positivo, ya que se pudo determinar la identidad de la víctima con un 99,996% de seguridad.