| PCR ANIDADO PCR MIX 1 ____________________________________________________________________ Reactivos Concentración final Volumen para 1 tubo _____________________________________________________ - buffer Taq (10X) 1X 1 ml - cebador 1A (10 mM) 1mM 1 ml - H20 dEPC estéril 8 ml _____________________________________________________ Vf: 10 ml - A cada tubo de RT-PCR resultante del paso anterior, lo rotulamos aumentando una B y le añadimos : __________________________________ 20 ml RT-PCR Mix 5 ml PCR Mix 1 1 ml Taq Pol __________________________________ Vf: 26 ml __________________________________ Condiciones del termociclador: 94°C 5 min File 35 94°C 1 min 55°C 1 min 30 seg File 36 72°C 1 min Tomamos otro tubo de 0,5 ml y lo rotulamos con el número de mesa correspondiente y la letra C. Y añadimos los componentes de la siguiente tabla: PCR MIX 2 ____________________________________________________________________ Reactivos Concentración final Volumen para 1 tubo _____________________________________________________ - buffer Taq (10X) 1X 2 ml - dNTPS (8mM) 0,8 mM 2 ml - cebador 1B (4 mM) 0,2 mM 1 ml 2D (4 mM) 0,2 mM 1 ml - H20 dEPC estéril 14 ml _____________________________________________________ Vf: 20 ml _____________________________________________________ |