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  PCR ANIDADO
PCR MIX 1
____________________________________________________________________ 
Reactivos      Concentración final      Volumen para 1 tubo
_____________________________________________________
- buffer Taq (10X)  1X              1 
ml
- cebador 1A  (10
mM) 1mM              1  ml
- H20 dEPC estéril                                              8 
ml
_____________________________________________________
        Vf:    10
ml

- A cada tubo de RT-PCR resultante del paso anterior, lo rotulamos aumentando una B y  le  añadimos :
__________________________________
  20 
ml              RT-PCR Mix
    5 
ml              PCR Mix 1
    1 
ml              Taq Pol
__________________________________
Vf:    26 
ml    __________________________________

  Condiciones del termociclador:     
  94°C  5 min      File 35
  94°C  1 min
  55°C  1 min  30 seg      File 36
  72°C  1 min

Tomamos otro tubo de 0,5 ml y lo rotulamos con el número de mesa correspondiente y la letra C. Y añadimos los componentes de la siguiente tabla:

PCR MIX 2
____________________________________________________________________
Reactivos        Concentración final      Volumen para 1 tubo
_____________________________________________________
- buffer Taq (10X)          1X            2
ml
- dNTPS    (8mM)        0,8 mM            2
ml
- cebador 1B  (4
mM)      0,2 mM            1 ml
                2D  (4
mM)      0,2 mM          1 ml
- H20 dEPC estéril                                                      14
ml   
_____________________________________________________
            Vf:    20
ml
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